人真核翻译起始因子3C基因的克隆及表达

作者：赵谦; 孙潇; 罗真真; 董怡萍; 韩苏夏^*

来源：西部医学, 2019, 31(09): 1328-1333.

• 真核翻译起始因子3C
• 人下咽鳞癌细胞
• 基因克隆
• 真核表达

目的构建人真核翻译起始因子3C(Eukaryotic Translation Initiation Factor 3 Subunit C,EIF3C)编码区全长的真核表达载体,转染FaDu人下咽鳞癌细胞系,为探讨EIF3C的生物学功能奠定基础。方法从人下咽鳞癌细胞系中提取总RNA,反转录成cDNA后用特异性引物PCR扩增EIF3C基因编码区全长(NM_001037808.2),双酶切后将EIF3C基因编码区全长克隆到载体pCMV-Blank上,构建真核表达载体pCMV-EIF3C。转染FaDu细胞系,real-timePCR和Western blot检测EIF3C表达水平。将未加质粒转染FaDu细胞作为未加质粒转染组,加质粒pCMV-Blank作为pCMV-Blank转染组,以及加质粒pCMV-EIF3C作为pCMV-EIF3C转染组。分别将pCMV-EIF3C转染组EIF3C的mRNA和蛋白表达水平与未加质粒转染组、pCMV-Blank转染组进行比较,以及比较未加质粒转染组和pCMV-Blank转染组。通过生物信息学网站和软件分析人EIF3C氨基酸序列的理化性质、磷酸化位点、二级结构和三维结构。结果测序结果表明构建的真核表达载体pCMV-EIF3C中人EIF3C序列正确。转染实验表明载体pCMV-EIF3C转染组EIF3C的mRNA水平相比载体pCMV-Blank转染组升高7.08倍,未加质粒转染组升高8.02倍(P<0.001),且载体pCMV-EIF3C转染组蛋白表达水平相比于载体pCMV-Blank转染组和未加质粒转染组也显著升高(P<0.05)。EIF3C蛋白质由913个氨基酸组成,预测含有27个磷酸化位点,其二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。结论成功构建真核表达载体pCMV-EIF3C,并使EIF3C在下咽鳞癌细胞系中过表达。

• 单位
  西安交通大学第一附属医院