抗棉铃虫Ⅳ型几丁质酶(HaCHT4)小鼠多克隆抗体的制备与鉴定

作者：麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔; 古新蓉; 马纪; 马小丽; 刘小宁^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2018, 34(09): 845-849.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008678

• 棉铃虫
• Ⅳ型几丁质酶(HaCHT4)
• 多克隆抗体
• 免疫特异性

目的原核表达棉铃虫Ⅳ型几丁质酶(HaCHT4)并制备其多克隆抗体。方法在大肠杆菌中表达组蛋白-HaCHT4融合蛋白(His-HaCHT4),镍柱纯化目的蛋白,经足垫加皮下注射免疫小鼠。4次免疫后,用ELISA检测抗His-HaCHT4多克隆抗体的效价,Western blot法检测其免疫特异性。结果成功纯化His-HaCHT4融合蛋白,小鼠抗His-HaCHT4的多克隆抗体的滴度高于1∶204 800。Western blot结果显示该抗体能与His-HaCHT4融合蛋白及棉铃虫体中的天然HaCHT4结合,但不能与黄粉虫的蛋白结合。结论成功原核表达和纯化了His-HaCHT4,制备了特异性的鼠多克隆抗体。