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摘要
目的 建立一种鼠疫多重荧光定量PCR内标检测方法，并进行应用效果评价。方法 选择鼠疫菌染色体YPO0393基因与pMT1质粒caf1基因为靶基因，设计合成YPO0393-内标模板、特异性引物和TaqMan荧光探针，构建鼠疫多重荧光定量PCR内标检测体系；对非鼠疫菌DNA、不同稀释浓度鼠疫菌DNA、野外监测样本进行检测，评价该方法的特异性、灵敏性、重复性和应用效果。结果 采用多重荧光定量PCR内标方法，8株鼠疫菌DNA均出现明显的扩增曲线，12株非鼠疫菌DNA未显示扩增曲线，提示该方法特异性良好。不同浓度的鼠疫EV76疫苗株DNA，检测最低限为22.5×10-4 ng/μL，变异系数为0.99～3.42，提示灵敏性、重复性较好。105份野外监测样本中，荧光定量PCR内标方法检测阳性的6份，与普通PCR方法检测结果一致，4份样本分离培养出鼠疫菌且采用PCR方法检测阳性。结论 通过设置双靶基因与内标对照，本研究建立的鼠疫多重荧光定量PCR内标方法可降低检测假阳性率，特异性、灵敏性和重复性理想，可用于鼠疫快速检测。
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单位新疆农业科学院; 新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心
