全人源单链抗体库噬菌体展示技术的建立

作者：张雨超; 丁龙飞; 陈健; 张晓燕; 徐建青

来源：中国生物制品学杂志, 2019, (01): 80-84+90.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.002447

• 抗体库
• 单链抗体
• 噬菌体展示 Antibody library
• Single-chain antibody fragment(scFv)
• Phage display

目的建立全人源单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)库的噬菌体展示技术。方法采集100名健康老年志愿者的外周血,5 mL/人,混合所有全血并分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),抽提RNA,反转录合成cDNA,以其为模板,IgG类抗体基因为引物,PCR扩增获得重链可变区片段(V_H)和轻链可变区片段(V_L),然后以V_H和V_L为模板,经重叠PCR获得scFv,经sfiⅠ酶切,插入pComb3xss载体,电转后获得一定容量的抗体库;加入辅助噬菌体VCSM13过夜培养,上清液经PEG...

• 单位
  上海市公共卫生临床中心; 温州医科大学; 生命科学学院