如皋黄鸡miR-1458与TBX6靶向关系验证

作者：耿晴晴; 程富富; 胡菜; 武嵘峰; 吴宇慧; 赵宗仪; 赵梓多; 张亚妮^*

来源：中国家禽, 2023, 45(08): 31-37.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2023.08.005

• 如皋黄鸡
• miR-1458
• TBX6
• SSCs
• 双荧光素酶报告检测

研究旨在探究miR-1458与TBX6的靶向调控关系。试验基于前期建立视黄酸（Retinoic acid,RA）体外诱导胚胎干细胞（ESCs）向精原干细胞（SSCs）的分化模型，通过RNA-seq测序结果发现ESCs向SSCs分化过程中差异表达的miR-1458，采用miRNA定量检测miR-1458在ESCs/SSCs中的表达量，miR-1458靶基因富集通路分析筛选出富集通路，分析其与生殖细胞发育的相关性。基于前期联合分析RA诱导ESCs的mRNA-seq数据中|log2(fold change)|>8筛选出的与miR-1458互作的差异性mRNA，依据靶基因预测软件数据库在线预测该基因与miR-1458是否存在结合位点，利用qRT-PCR验证两者的关系，同时利用同源重组法将靶基因的3′UTR及点突变序列插入pMIR-REPORTTM双荧光素酶报告载体中，共转染DF-1细胞，通过双荧光素酶报告载体确定miR-1458与TBX6的靶向调控关系。结果显示：ESCs向SSCs分化过程中差异表达miR-1458,miR-1458在生殖细胞分化过程中发挥重要作用；miR-1458与TBX6 3′UTR存在结合位点；miR-1458和TBX6分别在ESCs和SSCs中呈现此消彼长的表达趋势；miR-1458能够抑制TBX6的表达；miR-1458可靶向TBX6 3′UTR区调节TBX6的表达。研究表明miR-1458在鸡的ESCs和SSCs中呈现差异性高表达，并且miR-1458能够直接靶向调控TBX6 3′UTR区从而调节TBX6的表达，为后续研究miR-1458在SSCs形成过程中的机制探究奠定基础。

• 单位
  江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室; 扬州大学