人结直肠癌细胞Drosha基因敲除细胞模型的构建

作者：李芸侨; 李尚泽; 宋伟; 王任先; 张晓东; 王琳芳

来源：医学研究杂志, 2014, 43(06): 21-24.

• 基因敲除
• Drosha
• 同源重组
• 结直肠癌

目的为研究核酸酶Drosha与结直肠癌的关系,利用腺相关病毒(AAV)介导的染色体同源重组技术,构建Drosha基因敲除的HCT116结直肠癌细胞模型。方法设计引物通过PCR扩增Drosha基因的同源臂,构建Drosha的AAV病毒打靶载体,通过病毒的包装、感染、抗生素新霉素(G418)药物筛选、PCR以及Western blot鉴定获得基因敲除阳性细胞株,通过Cre病毒感染去除抗性基因,最终建立敲除Drosha基因的结直肠癌细胞模型。结果经过两轮打靶,分别将DNA双链上的Drosha基因去除并经Western blot鉴定,获得Drosha-/-阳性的HCT116细胞株。结论通过AAV病毒介导的染色体同源重组技术,成功构建Drosha基因敲除的HCT116细胞系。

• 单位
  中国医学科学院基础医学研究所; 北京协和医学院; 医学分子生物学国家重点实验室