幽门螺旋杆菌重组尿素酶B亚基的纯化及其免疫学性质的研究(英文)

作者：秦玉红; 刘昆梅; 廖国玲; 杨华; 徐广贤; 李秀萍; 郭乐

来源：中国生物工程杂志, 2014, 34(12): 23-29.

DOI：10.13523/j.cb.20141204

• 幽门螺旋杆菌
• 尿素酶
• 尿素酶B亚基

目的:幽门螺旋杆菌(Hp)尿素酶是Hp重要的定制因子和致病因子,Hp尿素酶活性位点位于Hp尿素酶B亚基(Ure B),研发基于Ure B的Hp疫苗是一种很有前景的防治Hp感染的策略。方法:主要利用基因克隆技术从幽门螺旋杆菌标准菌株SS1(Hp SS1)获得Hp尿素酶B亚基基因,并构建含有重组Hp尿素酶B亚基(rU reB)基因的重组表达载体p ET-rU re B及其重组菌株;重组菌株经蛋白表达和优化后,利用Ni-NTP镍离子亲和层析和DEAE Sepharose FF阴离子交换层析纯化重组尿素酶B亚基(rU re B),并进一步通过腹腔注射免疫BALB/c小鼠,研究rU re B的免疫学性质。结果:通过基因克隆技术成功获得了Hp尿素酶B亚基基因,并成功构建了重组表达载体p ET-rU re B及其重组菌株BL21(DE3)/p ET-rU re B,经蛋白表达优化及纯化,可获得高纯度(96.5%)的重组蛋白rU re B。重组蛋白rU re B辅以弗氏佐剂腹腔注射免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA鉴定小鼠能够产生针对天然Hp尿素酶和Ure B的高滴度特异性抗体,且能够显著性抑制Hp尿素酶的活性。结论:重组Hp尿素酶B亚基能够在大肠杆菌表达系统中获得较高水平的表达,具有较高的免疫学特异性,其抗体能够有效抑制Hp尿素酶活性。为研究基于尿素酶的防治Hp感染的Hp疫苗奠定了一定的实验基础。

• 单位
  宁夏临床病原微生物重点实验室; 宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院