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摘要
【目的】应用大肠杆菌表达系统表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E0蛋白，纯化后免疫小鼠制备E0蛋白多克隆抗体用于BVDV的检测技术研究。【方法】采用PCR扩增BVDV的E0基因，将其连接至pET-28a(+)构建重组表达载体pET28a-E0。将重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞，经IPTG诱导、亲和层析纯化后，通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定E0蛋白的表达情况。将纯化的E0蛋白免疫小鼠制备BVDV E0多克隆抗体，并通过Western blotting、细胞免疫荧光试验、ELISA等试验检测该多克隆抗体的特异性和效价，以及在BVDV检测中的应用。【结果】成功构建原核表达载体pET28a-E0,表达并纯化E0蛋白，制备的BVDV E0多克隆抗体可特异性识别纯化的E0蛋白及pET28a-E0在BL21中表达的总蛋白。进一步Western blotting、细胞免疫荧光试验、双抗夹心法ELISA证明制备的E0多克隆抗体可用于BVDV的检测。间接ELISA结果表明，E0多克隆抗体效价高于1∶64 000。【结论】制备的BVDV E0多克隆抗体效价高、抗原结合特异性强，为BVDV E0蛋白的生物学功能研究及BVDV的检测提供了材料支持。
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单位生命科学学院; 山东师范大学
