低毒性金葡萄球菌肠毒素A D227A突变体的原核表达、纯化及鉴定

作者：刘雪婷; 曾丽萍; 谢洋; 张建国; 邹泽红; 陶爱林

来源：中国免疫学杂志, 2018, 34(06): 882-891.

• SEA
• D227A突变
• 原核表达
• 蛋白纯化

目的:获得低毒性但仍保留其免疫活性、高纯度的重组D227A突变型金葡菌肠毒素A蛋白(rSEAD227A)。方法:利用PCR技术克隆含D227A突变的SEA基因并原核表达,用盐酸胍溶解包涵体并进行梯度透析复性;使用StrepⅡ亲和层析来纯化蛋白;免疫印迹和LC-MS/MS进行鉴定。结果:成功克隆SEA的D227A突变体,获得了高纯度的rSEAD227A蛋白。LCMS/MS分析证实,胰酶消化后的rSEAD227A肽段序列与数据库中SEA的序列匹配。结论:获得了高纯度rSEAD227A蛋白,为SEA的进一步基础研究和临床应用提供了实验基础。

• 单位
  广州医科大学附属第二医院; 呼吸疾病国家重点实验室