基于重组毕赤酵母的鲫鱼c型溶菌酶生物合成及其特性

作者：宋玉芳; 陶妍^*; 谢晶; 钱韻芳

来源：农业生物技术学报, 2021, 29(11): 2177-2188.

• 鲫鱼
• c型溶菌酶
• 重组毕赤酵母
• 抑菌活性
• 稳定性

c型溶菌酶是鲫鱼(Carassius auratus)先天性免疫机制中的关键性免疫蛋白,是绿色饲料添加剂或天然抗菌剂开发的良好候选者。本研究通过反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)技术克隆鲫鱼c型溶菌酶的cDNA,再经3次PCR获得目的基因CrCLm (crucian carp c-type lysozyme mature peptide)。以pPICZɑA为表达载体、毕赤酵母(Pichia pastoris) X-33为工程菌,构建重组菌株X-33/pPICZɑA-CrCLm;在初始pH 6、28℃和250 r/min条件下,以1.0%甲醇诱导重组菌株表达96 h;表达产物经镍离子亲和层析纯化后进行Western blot分析和LC-MS/MS质谱鉴定。另外,对重组菌株产物的抑菌活性和稳定性进行分析,结果显示,在上述发酵培养条件下获得18.3 mg/L重组蛋白,纯化后的质谱分析显示其为重组CrCLm (预期分子量为14.5 kD)。抑菌试验显示,重组CrCLm对革兰氏阳性菌—蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)、枯草芽胞杆菌(B. subtilisi)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)以及革兰氏阴性菌—大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella)、副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)具有明显的抑菌活性;不同酸性环境和高温处理后并不影响其抑菌活性;此外,重组CrCLm对胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K的水解具有良好的耐受能力。本研究为鲫鱼c型溶菌酶的规模化制备及应用提供技术支持。

• 单位
  上海海洋大学