人类VIM基因的克隆和真核表达载体的构建

作者：高圆; 崔莉; 王振刚

来源：现代生物医学进展, 2013, (09): 1615-1617+1614.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2013.09.002

• VIM基因
• 基因克隆
• 真核表达 VIM gene
• Gene cloning
• Eukaryotic expression

目的:构建VIM(Vimentin)基因的真核表达载体,以深入研究VIM的功能及其在相关疾病中的作用。方法:从人cDNA文库中,以RT-PCR方法扩增出1401 bp的VIM编码区片段,胶回收后连接入T载体,测序鉴定。再用Hind III和BamH I双酶切,将VIM编码区片段定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,酶切鉴定重组质粒。将重组质粒转染NIH3T3细胞,分别以RT-PCR和Western Blot方法检测VIM的mRNA表达和蛋白表达。结果:将人VIM编码区基因成功克隆到真核表达载体pcDNA3.1中;继而转染NIH3T3细胞后,RT-PCR和Western Blot结果显示细胞...

• 单位
  首都医科大学附属北京同仁医院