携带鸡贫血病毒凋亡素基因重组腺病毒质粒的构建及鉴定

作者：邓守明; 蔡召忠

来源：实用癌症杂志, 2015, 30(07): 954-957.

• 同源重组
• 凋亡素
• 腺病毒
• 增强绿色荧光蛋白

目的构建携带鸡贫血病毒凋亡素VP3基因的重组腺病毒质粒。方法设计VP3 c DNA扩增引物,从PET15b-VP3质粒中扩增VP3的DNA序列,与线性p Shuttle-IRES-hr GFP-2连接,PCR和EcoRⅤ酶切电泳鉴定;穿梭质粒p Shuttle-VP3-EGFP经Pmel酶切线性化后,转化含p Adeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒p Ad-VP3-EGFP,质粒经PCR、Pac I酶切电泳及测序鉴定。结果线性化的p Shuttle-VP3-EGFP转化含p Adeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,重组质粒经酶切获得一大于23 kb的大片段和4.5 kb的片段,PCR反应扩增出了402 bp的片段,重组质粒测序证实VP3-EGFP编码区成功克隆入了腺病毒p Ad中,且其序列与Gene Bank中VP3 CDNA序列完全一致。结论用细菌内同源重组法可快速、高效地制备携带凋亡素VP3基因的重组腺病毒质粒,为深入研究VP3的抗肿瘤效应及机制奠定了基础。

• 单位
  中国五冶集团有限公司医院; 湖北医药学院