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摘要
目的探讨儿童原代白血病细胞体外分离培养的有效方法,为儿童白血病生物学、细胞遗传学及体外诱导分化等研究提供更好的细胞来源。方法取25例初诊急性白血病患儿肝素抗凝的骨髓或外周血,以淋巴细胞分离液分离白血病细胞。倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8法检测原代白血病细胞增殖的活性。结果细胞形态学观察:分离0 h时细胞透亮,折光性强。72 h以内细胞仍为圆形透亮状,但折光性减弱,胞质中出现细颗粒状物质,还可见一些死亡细胞及碎片。之后细胞数量锐减,细胞状态差,液面漂浮很多死细胞。5 d后细胞基本死亡。细胞增殖活力测定提示:同一时间点,高密度细胞组[(4～10)×106.mL-1]较低密度细胞组([1～2)×106.mL-1]有更高的细胞存活率;而同一细胞密度2,4 h细胞状态最好4,8～72 h虽有部分细胞死亡,但差异无统计学意义(P>0.05)。胎牛血清对于原代白血病细胞增殖作用优于患者血清,差异有统计学意义(P<0.05)。但10%与20%的胎牛血清成分对细胞影响无差异。结论对于原代白血病细胞的短期体外培养,选择[(4～6)×106.mL-1]细胞密度与含10%胎牛血清的培养基进行培养效果最理想。
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