ZNF230/荧光蛋白融合基因表达载体的构建及其在Cos细胞中的表达与定位

作者：许文明; 张思仲; 邱为民; 何国平; 刘运强; 马用信; 孙岩

来源：遗传, 2004, (04): 451-454.

DOI：10.16288/j.yczz.2004.04.005

• znf230基因
• 绿色荧光蛋白
• 基因表达定位
• Cos细胞

为了用绿色荧光蛋白标记观察人类无精症相关基因ZNF230在Cos7细胞中的蛋白质表达及定位,用PCR方法扩增得到突变的人和小鼠mt ZNF230和mt znf230基因,使其3′端的终止密码TGA突变为TGG,并装入T 载体,双酶切后通过定向克隆将其与真核表达载体pEGFP N1的绿色荧光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)基因融合,构建了ZNF230—荧光蛋白融合基因表达载体。然后经真核表达质粒-脂质体介导,导入Cos7细胞系。荧光显微镜观察显示:在空白载体pEGFP N1转染的Cos细胞中荧光布满整个细胞,而在转染阳性载体pEGFP ZNF230和pEGFP znf230的Cos细胞中荧光主要聚集在细胞核中。表明转染的Cos细胞系能高效表达人ZNF230和小鼠znf230蛋白,ZNF230基因表达的蛋白定位于细胞核内。

• 单位
  四川大学华西医院