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摘要
CRISPR-Cas9基因编辑技术在酿酒酵母中已经得到广泛的应用，但是Cas9作为外源蛋白在酿酒酵母内表达，它对酿酒酵母的生长以及生产天然产物的影响尚不明确。该研究将Cas9基因分别以整合基因组和构建到载体上的形式在酿酒酵母内表达，同时选择2种天然产物类胡萝卜素和次丹参酮二烯为目标产物，研究Cas9表达对酵母生长和生产能力的影响。结果表明，Cas9基因无论整合到基因组表达还是利用载体进行表达，Cas9对酿酒酵母的生长都会产生抑制，并以整合到基因组更为明显。当Cas9基因整合到基因组表达时，对酿酒酵母生产类胡萝卜素和次丹参酮二烯没有影响，但是当Cas9基因利用载体进行表达时，都显著降低了酿酒酵母生产类胡萝卜素和次丹参酮二烯的能力。因此为了进一步能在基因编辑后高效敲除Cas9基因，将Cas9对酿酒酵母的不利影响降到最小。该文系统研究了Ura3载体和Trp1载体的剔除效率，并构建了能够高效进行基因编辑的质粒，优化了CRISPR-Cas9基因编辑系统在酿酒酵母内的应用，为基于Cas9的基因编辑技术的应用提供参考。
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单位中国中医科学院; 南京中医药大学
