电子转移黄素蛋白A对肝癌细胞SMMC-7721恶性生长的影响

作者：刘根玉; 赵敏; 郭璐; 张纪岩

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2021, 35(02): 96-101.

• 电子转移黄素蛋白A
• 脂肪酸
• β氧化
• 肝细胞癌

目的探讨线粒体β氧化关键蛋白电子转移黄素蛋白A（ETFA）对肝癌细胞SMMC-7721恶性生长的影响及潜在的调控机制。方法将携带对照短发夹RNA（shRNA）或人ETFA shRNA 1#和2#的pGPU6/Hygro载体转染SMMC-7721细胞,分别为对照组、ETFA-1#组和ETFA-2#组。通过潮霉素筛选得到稳定敲低ETFA的SMMC-7721细胞克隆,并用Western印迹法检测细胞中ETFA蛋白水平,对稳定敲低细胞进一步鉴定。将筛选得到的稳定细胞用于以下实验。将细胞与0.3%琼脂混匀,均匀铺于6孔板（每孔1×10～3细胞）,第10天观察集落形成并计数。每只裸小鼠皮下注射2×10～6细胞进行皮下成瘤实验,于第14天开始每2 d测量1次瘤体体积,第28天测瘤重。将细胞接种于6孔板,用尼罗红染色法于激光共聚焦显微镜下观察细胞中脂质堆积。将细胞固定后,使用扫描电镜观察细胞超微结构的变化。结果 Western印迹法结果显示,ETFA-1#和ETFA-2#组SMMC-7721细胞ETFA的表达水平明显低于对照组,表明稳定敲低ETFA的SMMC-7721细胞构建成功。集落形成实验结果显示,在细胞接种第10天,对照组细胞平均克隆数为99±7,ETFA-1#组为55±5（P3）为1220±474,ETFA-1#组为671±246（P<0.01）,ETFA-2#组为534±217（P<0.01）;对照组瘤块平均质量（g）为0.65±0.21,ETFA-1#组为0.39±0.13（P<0.01）,ETFA-2#组为0.40±0.15（P<0.01）。尼罗红染色结果显示,敲低ETFA的SMMC-7721细胞中可见大量红色斑点,而对照组未见此现象。在透射电镜下,敲低ETFA的SMMC-7721细胞中可见数量较多、体积较大的脂滴,而对照组未见明显脂滴。结论敲低ETFA可抑制SMMC-7721细胞体外非锚定生长能力和体内成瘤能力,其机制可能与脂质代谢障碍有关。