新布尼亚病毒真核表达载体的构建及表达

作者：窦丽丽; 陶晓莉; 王晓芳; 李婷婷; 李永刚^*

来源：中国人兽共患病学报, 2020, 36(04): 280-284.

• 新布尼亚病毒
• 载体构建
• 293细胞
• 表达

目的探究SFTSV-NSs基因的结构和功能以及病毒在感染细胞过程中与宿主的相互作用,通过构建SFTSV-NSs真核表达载体SFTSV-NSs-FLAG,并将其转染进293细胞内,为进一步研究SFTSV-NSs基因的结构和功能奠定基础。方法利用RT-PCR扩增SFTSV-NSs基因序列并测序,并将纯化得到的SFTSV-NSs cDNA片段连接到pFLAG-CMV-3载体,通过EcoRI/BamHI双酶切鉴定重组质粒。将重组表达体pSFTSV-NSs-FLAG导入293细胞中,共聚焦显微镜下观察SFTSV-NSs在细胞中的定位、 Western Blot检测SFTSV-NSs蛋白在293细胞中的表达情况。结果成功克隆测序SFTSV-NSs基因;成功构建SFTSV-NSs真核表达载体pSFTSV-NSs-FLAG,并将其转染到293细胞中。在293细胞中的表达检测结果显示共聚焦显微镜下观察重组体主要集中在细胞质中,并形成类包涵体样结构;且Western Blot检测结果显示SFTSV-NSs蛋白在293细胞中表达。结论为进一步研究SFTSV-NSs基因的结构和功能以及病毒在感染细胞过程中与宿主的相互作用提供新思路。

• 单位
  基础医学院; 锦州医科大学