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摘要
本发明公开了一种Mdr1a/1b双基因敲除的方法,并成功构建了Mdr1a/1b基因敲除大鼠模型,为研究P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的功能例如介导药物的转运提供了新的动物模型。本发明首次利用CRISPR/Cas9技术进行大鼠P-gp的基因敲除,通过Mdr1a和Mdr1b靶点设计、sgRNA体外合成与转录、假孕鼠的准备、受精卵体外显微注射与胚胎移植等过程得到了F0代嵌合鼠,再经过两代繁殖筛选,最终得到了Mdr1a/1b双基因敲除的纯合子大鼠。经T7EI核酸内切酶验证,在所得到的基因敲除大鼠中没有出现脱靶现象。
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