野生型及突变型人Toll样受体23′非编码区基因重组质粒的构建及鉴定

作者：包丽丽; 孙传凯; 李晓玫; 任向宇; 殷兆丽; 孙晓琳; 福泉^*; 纳仁高娃^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(05): 557-561.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003618

• Toll样受体2
• 3′非编码区
• 基因重组

目的 构建野生型及突变型人Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)3′非编码区（3′UTR）基因重组质粒，并进行鉴定。方法 提取293T细胞基因组DNA，以其为模板进行PCR扩增，获得TLR2的3′UTR基因片段，连接至载体pmiR-RB-REPORTTM，转化感受态E. coli DH5α，于LB(Amp+)固体培养基中培养过夜，菌落PCR筛选阳性克隆，并测序。根据TLR2 3′UTR与miR-122的预测结合靶点，设计突变型TLR2 3′UTR扩增引物，以构建的野生型TLR2 3′UTR重组质粒为模板，PCR扩增突变序列，相同方法进行载体连接及转化，挑取菌落，测序。结果 野生型TLR2 3′UTR重组菌经菌落PCR鉴定，可见1 000 bp的目的基因片段，大小与预期相符；测序结果表明，插入序列与TLR2 3′UTR序列完全一致。突变型TLR2 3′UTR重组质粒测序鉴定结果表明，靶序列CACTCC已更改为GTGAGG。结论 成功构建了野生型及突变型人TLR2 3′UTR重组质粒，本实验为TLR2功能的深入研究提供了实验依据。

• 单位
  基础医学院; 内蒙古医科大学附属医院; 内蒙古医科大学