胞质内DNA依赖的干扰素调节因子激活物在HBV复制中的作用

作者：王秋景; 李世波; 黄红平; 刘慎沛; 杨燕^*; 杨东亮

来源：中华肝脏病杂志, 2015, 23(12): 934-938.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2015.12.005

• 肝炎病毒, 乙型
• 癌, 肝细胞
• 干扰素I型
• DNA识别蛋白

目的观察细胞质内的DNA依赖的干扰素调节因子激活物(DAI)对HBV复制的影响, 并初步探讨其影响机制。方法首先将siDAI与HBV1.3复制型质粒pHY106共转染HepG2细胞, 实验分两组:一组转染后6 h, 提取细胞总RNA, 实时定量RT-PCR检测细胞内干扰素诱导的含三角形四肽重复蛋白(IFIT)1与白细胞介素6的表达水平。另一组在转染后第4天收集细胞上清液, 酶联免疫吸附法检测HBsAg与HBeAg的表达水平;抽提细胞内的HBV核心颗粒, Southern blot检测细胞内HBV复制中间体(松弛环状DNA、双链线性DNA、单链DNA)。然后将siDAI、siTBK与HBV1.3复制型质粒pHY106共转染HepG2细胞, 同样方法检测转染后细胞上清液中HBsAg和HBeAg的表达。两组间均数比较采用独立样本t检验, 多组间比较采用方差分析。结果 siDAI转染导致了胞内DAI表达下调;DAI表达水平下降后HBV的复制与病毒蛋白表达受到了抑制:HBsAg和HBeAg的相对表达水平在siDAI组分别为0.0195±0.0050、0.0140±0.0040, 在空白对照组为0.3150±0.0200、0.0124±0.0135, 差异有统计学意义(t = 14.770, P < 0.05;t = 7.777, P < 0.05);且抑制效果呈剂量依赖性。下调DAI后, 对HBV诱导的IFIT1、白细胞介素6表达没有影响(P > 0.05)。同时下调DAI和TBK1后, HBV蛋白表达仍然受到抑制。结论下调DAI能抑制HBV的复制与蛋白表达, 其机制与I型干扰素及核因子-κB信号通路无关。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 华中科技大学同济医学院附属协和医院; 温州医科大学; 舟山医院