肺腺癌单细胞基因突变检测的细胞回收液的影响研究

作者：冯琪文; 周慧; 刘彦辰; 徐涛

来源：生物医学工程与临床, 2018, 22(01): 87-93.

DOI：10.13339/j.cnki.sglc.20180110.019

• 肺腺癌
• 微流控芯片
• 单细胞
• 突变检测
• 实时荧光定量
• 聚合酶链反应(PCR)

目的研究不同的单细胞回收液对肺癌单细胞突变检测的影响,为后续的肿瘤基因异质性检测和研究奠定基础。方法以肺癌细胞系A549细胞为研究对象,采用微流控芯片技术,将肺癌A549细胞进行分离;将A549单细胞分别回收于达氏修正依氏培养液(DMEM)、磷酸盐缓冲溶液(PBS)和0.9%氯化钠溶液(生理盐水)中,每组30个单细胞;分别加入裂解液进行单细胞裂解,用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)对单细胞进行KRAS(G12S)基因突变检测,比较3种溶液体系对测定结果的影响。结果采用微流控芯片进行单细胞分离和回收,只要有单个细胞越过阀门,就能够被成功分离回收,回收效率能够达到100%。采用0.9%氯化钠溶液筛分出的单细胞KRAS(G12S)突变检测检出率最高,能够达到90%,平均Ct值最低;采用DMEM筛分出的单细胞KRAS(G12S)突变检测检出率最低,平均Ct值最高。结论采用0.9%氯化钠溶液进行单细胞分离、回收,实时荧光定量PCR扩增效率最高,检测效果最好,最适合用于癌症单细胞水平突变检测。

• 单位
  锦州医科大学