猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白基因ORF3、ORF5和ORF6在真核细胞中表达

作者：闫丽萍; 周艳君; 侯艳红; 华荣虹; 安同庆; 童光志

来源：中国预防兽医学报, 2007, (07): 501-505+514.

• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 结构蛋白基因
• 真核表达 porcine reproductive and respiratory syndrome virus
• structural protein gene
• eukaryotic expression

用PCR方法从重组质粒pOKCH-1a扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白基因ORF3、ORF5、ORF6,将它们分别定向克隆到含有鸡β-actin启动子的高效真核表达载体pCAGGS的多克隆位点,经酶切、PCR及测序分析,筛选鉴定出含有ORF3、ORF5、ORF6基因的重组质粒,分别命名为pCAGGS-ORF3、pCAGGS- ORF5、DCAGGS-ORF6。将重组质粒纯化后转染293T细胞,用RT-PCR扩增出了特征性的基因片段,并采用特异性单抗进行间接免疫荧光检测,结果在胞浆内有亮绿色荧光,而在细胞膜上没有见到荧光,这说明表达的蛋白在胞浆内而不在细胞膜上。通过Westerm blot检...

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所