OKP-B-13型β-内酰胺酶的克隆与表达

作者：卢月梅; 张阮章; 王沙燕; 胡玉华; 穆雪鵾; 陈升汶

来源：中国微生态学杂志, 2010, (02): 146-148.

DOI：10.13381/j.cnki.cjm.2010.02.014

• β-内酰胺酶
• 原核表达
• 等电聚焦电泳 β-lactamase
• Prokaryote expression
• Isoelectric focusing electrohporesis

目的构建OKP-B-13型β-内酰胺酶的表达载体。方法抽提菌株的质粒,应用PCR扩增OKP-B-13基因全长编码序列,扩增产物经Nde I、Xho I酶切后连接至pET-26b( )表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得879 bp的产物,重组表达载体经Nde I、Xho I酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b( )/OKP-B-13]构建成功。目...

• 单位
  暨南大学; 深圳市人民医院