绒毛膜癌氟尿苷耐药细胞系的建立及其胸苷合成酶的表达

作者：韩冰; 向阳; 沙桂华; 张浩; 刘欣

来源：中华妇产科杂志, 2009, 44(11): 851-855.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2009.11.013

• 绒毛膜癌
• 细胞系
• 肿瘤
• 氟尿苷
• 抗药性
• 胸苷酸合酶

目的 建立对氟尿苷(FUDR)耐药的绒毛膜癌(绒癌)细胞系,鉴定其生物学特性,并探讨胸苷合成酶(TS)在绒癌FUDR耐药细胞中的表达.方法 采用间断诱导法诱导绒癌细胞系JeG-3,建立绒癌FUDR耐药细胞系JeG-3/FUDRA(诱导浓度为2.3×10~(-3) mol/L).倒置显微镜观察细胞形态;活细胞计数(CCK-8)法观察敏感细胞和耐药细胞的生长和耐药指数;化学发光法测定培养液中的激素水平;流式细胞仪检测细胞周期比例和染色体倍性;荧光定量PCR技术检测不同浓度FUDR(2.3×10~(-3)、5.1×10~(-5)、5.1×10~(-7) mol/L)诱导的JeG-3细胞(JeG-3/FUDRA、JeG-3/FUDRC、JeG-3/FUDRE)中TS mRNA的表达.结果 (1)绒癌耐药细胞系JeG-3/FUDRA的建立及生物学鉴定:历时10个月成功建立了绒癌耐药细胞系JeG-3/FUDRA,其耐药指数为31.62.与JeG-3亲本细胞相比,JeG-3/FUDRA耐药细胞的形态发生明显改变,细胞生长明显减慢(P＜0.05),群体倍增时间明显延长[分别为(27.4±0.8)和(47.3±2.1)h,P＜0.01];G_2/M期细胞比例明显下降[分别为(27±6)%和(9±3)%,P＜0.05],G_0/G_1,期细胞比例明显增加[分别为(29±3)%和(63±7)%,P＜0.01];染色体数目明显增加[分别为(76±5)和(143±5)条,P＜0.01];其培养液中人绒毛膜促性腺激素(hCG)水平明显下降[分别为(29.1±9.9)和(8.9±0.9)mU/ml,P＜0.05],孕酮水平明显下降[分别为(31±8)和(16±3)ng/ml,P＜0.05].(2)耐药细胞中TS mRNA的表达:经低浓度FUDR诱导后,JeG-3/FUDRE细胞中TS mRNA的表达水平下调;随着FUDR诱导浓度的增加和作用时间的延长,细胞中TS mRNA的表达水平逐渐恢复,其中JeG-3/FUDRC细胞中TS mRNA表达水平和JeG-3亲本细胞比较,差异无统计学意义(P＞0.05);而JeG-3/FUDRA细胞中TS mRNA表达水平则明显高于JeG-3亲本细胞(P＜0.05).结论 本研究成功建立了绒癌FUDR耐药细胞系JeG-3/FUDRA,随着FUDR浓度的增加和作用时间的延长,其TS mRNA的表达有阶段性的差异.就本研究结果而言,TS mRNA表达水平的高低不适用于作为肿瘤是否对FUDR耐药的指标.

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院; 北京协和医院