RNA干扰技术沉默TRAF6对脂多糖诱导肾小管上皮细胞表型转化及炎症因子表达的影响

作者：刘明龙; 梁耀军; 李侃; 杨洋; 马占军; 吴蓉; 王凤丽

来源：兰州大学学报(医学版), 2017, 43(03): 32-38.

DOI：10.13885/j.issn.1000-2812.2017.03.007

• 肿瘤坏死因子受体相关因子6
• HK-2细胞
• RNA干扰
• 表型转化

目的探讨RNA干扰技术沉默脂多糖诱导人肾小管上皮细胞HK-2中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因表达后,对HK-2细胞表型转化及炎症因子表达的影响。方法应用阳离子脂质体法将设计合成的TRAF6小干扰RNA(siRNA)瞬时转染HK-2细胞。将HK-2细胞分为空白对照组、脂多糖组、阴性对照组和TRAF6 RNA干扰组。各组培养6、12、24 h后,倒置显微镜观察细胞形态,噻唑蓝法检测细胞增殖,酶联免疫吸附测定法检测细胞中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,实时荧光定量PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TRAF6 mRNA的含量,蛋白免疫印迹法检测TRAF6、α-SMA、p38、c-Jun氨基端激酶—丝裂原活化蛋白激酶(JNK MAPK)和核因子-κB抑制蛋白(NF-κB)的表达。结果 TRAF6 siRNA能显著降低脂多糖诱导HK-2细胞中TRAF6、α-SMA mRNA含量和蛋白的表达,TRAF6 siRNA转染后HK-2细胞的增殖能力减弱,细胞因子IL-6、TNF-α含量下降,p38、JNK MAPK和NF-κB蛋白的磷酸化水平均明显降低,均P<0.05。结论 TRAF6可通过MAPK-NF-κB信号通路介导脂多糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应和细胞表型转化。

• 单位
  兰州大学第二医院; 甘肃省中医学校; 基础医学院; 兰州大学; 兰州大学第一医院