普通白菜1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基基因Bcrbc S的克隆及表达分析

作者：刘东让; 侯喜林; 肖栋^*

来源：中国蔬菜, 2019, (01): 20-25.

DOI：10.19928/j.cnki.1000-6346.2019.01.006

• 普通白菜
• 1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基基因
• 序列分析
• qRT-PCR
• 原核表达

利用RACE技术,从普通白菜抗霜霉病品种苏州青叶片克隆到1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基(ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase small subunit,Bcrbc S)基因的全长c DNA序列。采用q RT-PCR分析该基因在普通白菜不同组织的表达模式。利用SDS-PAGE技术分析了该基因的原核表达特征。序列分析结果表明,Bcrbc S基因的c DNA序列全长为733 bp,其中开放阅读框长度为543 bp,共编码181个氨基酸,分子质量为20.3×103 Da,理论等电点为8.23。氨基酸同源系统进化分析表明,普通白菜Bcrbc S基因与同科植物的进化关系相近。实时定量分析结果表明,Bcrbc S基因在普通白菜叶中表达最强;在SA和Na Cl处理下,Bcrbc S基因表达量均在处理24 h后达到峰值。原核表达载体经IPTG诱导表达出分子质量约为20×103 Da的融合蛋白。

• 单位
  作物遗传与种质创新国家重点实验室; 中国农业科学院蔬菜花卉研究所; 南京农业大学