实时荧光定量PCR检测脂多糖对NR8383细胞TNF-α mRNA的影响

作者：熊东林; 丁成志; 曾振国; 钱克俭

来源：实用临床医学, 2011, 12(04): 1-3+6.

• 实时荧光定量PCR
• NR8383细胞系
• 肿瘤坏死因子-α
• 脂多糖

目的实时荧光定量PCR检测脂多糖(LPS)诱导NR8383肺泡巨噬细胞前后TNF-αmRNA的表达情况。方法体外培养的肺泡巨噬细胞系NR8383分成LPS刺激组和PBS(磷酸盐缓冲液)对照组,LPS终浓度为1μg.mL-1,共培养2 h后,TRIzol法提取细胞总RNA,SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测细胞TNF-αmR-NA的表达,结合管家基因β-Actin进行相对定量分析。结果荧光定量PCR未发现非特异性扩增。与对照组比较,LPS刺激组细胞TNF-αmRNA上调了124.1倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论用于本研究TNF-αmRNA的荧光定量PCR检测体系特异性好,结果可靠,为进一步实验奠定了基础。

• 单位
  南昌大学第一附属医院; 深圳市第六人民医院