猪圆环病毒2b型病毒样颗粒表面可用于外源肽展示的位点分析

作者：李国攀; 荣俊^*; 谢明; 匡红艳

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (17): 12-140.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2022.02.0136

• 猪圆环病毒2b型
• 病毒样颗粒
• 表面展示
• 原核表达系统
• 嵌合病毒样颗粒

为了分析猪圆环病毒2b型病毒样颗粒(virus-like particles of Porcine circovirus type 2b, PCV-2b VLPs)表面具有外源肽展示潜力的位点，试验通过PyMol软件分析了PCV-2b VLPs表面的位点分布，并以高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Gp5的中和表位B(Epitope B, EpB)为外源肽，通过重叠PCR方法将表面位点替换为EpB,构建EpB嵌合的PCV-2b衣壳蛋白(Cap),利用原核表达系统诱导表达后进行凝胶层析纯化和Western-blot检测，并利用透射电子显微镜分析VLPs的组装状态。结果表明：在PCV-2b VLPs表面共筛选到8个可用于外源肽展示的位点，分别为S1(Y50TIKRTTVKTP60)、S2(L75PPGGGSN82)、S3(F124VTKATAL131)、S4(V161LDSTIDY168)、S5(Q183TAGNVD189)、S6(I201YDQE205)、S7(K222DPPL226)、S8(S104PITQGDRGVGS115)位点；将EpB替换展示到S1～S8位点后，构建的EpB嵌合的PCV-2b Cap能够在原核表达系统中获得不同程度的可溶性表达，其中S1～S7位点被EpB替换后能够实现较高水平的可溶性表达；8个目的蛋白均能被抗EpB抗体特异性识别，也均能够自组装形成VLPs,但粒径大小和形态与PCV-2b VLPs有不同程度的差异。说明试验筛选出的8个位点均有一定的外源肽展示能力。

• 单位
  生命科学学院; 长江大学