抑制性消减杂交筛选生长期毛乳头细胞差异表达基因

作者：杨希川; 郝飞; 杨卫兵; 宋志强; 程波; 钟白玉; 向明明

来源：中华皮肤科杂志, 2004, (11): 25-27.

• 毛囊
• 斑秃
• 基因文库
• 抑制性消减杂交

目的应用抑制性消减杂交构建生长期毛囊毛乳头细胞(DPC)差异表达cDNA消减杂交文库,从中克隆鉴定出差异表达基因。方法分别从生长期DPC及休止期DPC提取总RNA;采用SMARTcDNA合成技术合成cDNA,进行2次消减杂交及2次抑制性PCR;将产物与T/A载体连接构建生长期毛囊DPC的cDNA消减文库,通过反向RNA印迹杂交验证阳性克隆,测序并登录基因库寻找同源性基因。结果成功构建了毛囊生长期DPC消减文库,并获得35个阳性克隆,其中功能已知基因22个,功能未知基因13个。结论抑制性消减杂交技术是一种高效的筛选差异基因的方法,并可用于小量临床标本研究,本实验所发现的生长期DPC差异表达基因对今后研究毛囊生长调控可能具有重要意义。

• 单位
  第三军医大学西南医院