大鼠端粒酶逆转录酶转染星形胶质细胞培养液对缺氧缺血神经元的保护作用

作者：段周谨; 屈艺; 赵凤艳; 唐彬秩; 李姣; 母得志

来源：中国修复重建外科杂志, 2010, 24(10): 1217-1223.

• 端粒酶逆转录酶
• 星形胶质细胞
• 神经元
• 缺氧缺血
• 再灌注
• 大鼠

目的端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)是决定细胞生长与寿命的关键因素,也与细胞抵制应激和减少凋亡密切相关。通过构建脑神经元体外缺氧缺血再灌注(hypoxia-ischemia-reperfusion,HI-RP)模型,探讨大鼠TERT转染星形胶质细胞(astrocytes,AS)的培养液对HI损伤神经元的影响。方法构建大鼠全长TERT表达质粒pcDNA3-TERT。取20只新生3d SD大鼠处死后取大脑皮层,分离培养AS,通过脂质体介导用pcDNA3-TERT及pcDNA3转染AS,作为pcDNA3-TERT转染组及pcDNA3转染组,以未转染质粒的AS(未转染组)作为对照。免疫细胞化学染色检测各组AS特异性标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fi brillary acidic protein,GFAP)及目的基因TERT的表达。分别收集pcDNA3-TERT转染组、pcDNA3转染组、未转染组的AS条件培养液(astrocyte conditioned medium,ACM),分别为TERT-ACM、p-ACM及ACM。取60只新生当天SD大鼠,处死后取大脑皮层进行神经元原代培养,取培养8～9d的大鼠神经元随机分为对照组、ACM组、p-ACM组、TERT-ACM组及正常组。前4组分别于无血清DMEM培养基及含ACM、p-ACM、TERT-ACM的无血清DMEM培养基中进行HI培养3h后,再体外模拟RP3、6、18、24、36h;正常组神经元不作处理。采用MTT法测定神经元存活率、比色法测定神经元培养液中乳酸脱氧酶(loctate dehydro-genase,LDH)活性、TUNEL法检测神经元凋亡情况。结果免疫细胞化学染色示,未转染组、pcDNA3-TERT转染组及pcDNA3转染组的GFAP阳性细胞百分率分别为98%、99%、98%;未转染组与pcDNA3组未见TERT表达,pcDNA3-TERT转染组TERT阳性细胞百分率达98%。MTT检测显示,对照组、ACM组、p-ACM组及TERT-ACM组神经元存活率均较正常组降低,其LDH活性及TUNEL检测凋亡指数均较正常组增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。ACM组、p-ACM组与对照组比较,在HI3h及RP3h神经元存活率均增高,LDH活性及凋亡指数均降低,差异有统计学意义(P<0.05);但之后各时间点各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。各时间点TERT-ACM组与对照组、ACM组和p-ACM组比较,神经元存活率均增高,LDH活性及凋亡指数均降低,差异有统计学意义(P<0.05);各时间点p-ACM组与ACM组各项指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论经质粒pcDNA3-TERT转染AS培养液处理的大鼠神经元对HI损伤有更强的耐受性,转染AS培养液可能对HI神经元具有保护作用。

• 单位
  四川大学华西第二医院