原代肝细胞外泌体对肝星状细胞活化的影响

作者：周霞; 黄佳; 瞿祥; 李亚骐; 朱加应; 姜海行^*

来源：贵州医科大学学报, 2022, 47(11): 1281-1287.

DOI：10.19367/j.cnki.2096-8388.2022.11.004

• 原代肝细胞
• 肝星状细胞
• 肝细胞外泌体
• α-平滑肌肌动蛋白
• Ⅰ型胶原

目的 探讨原代肝细胞外泌体对肝星状细胞(HSC)活化的影响。方法 在原位两步胶原酶灌流法的基础上，分别分离培养小鼠原代肝细胞及HSC，采用肝细胞糖原染色法和细胞角蛋白18(CK-18)细胞化学染色法鉴定原代肝细胞，采用α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)细胞免疫荧光染色法鉴定原代HSC;采用exo Easy Maxi Kit试剂盒提取肝细胞外泌体，用电镜法、纳米颗粒跟踪分析(NTA)及蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定肝细胞外泌体;将肝细胞外泌体与活化HSC共培养24 h，采用逆转录-实时定量PCR(qRT-PCR)法检测HSC中α-SMA及Ⅰ型胶原(COL1A1) mRNA表达。结果 原位两步胶原酶灌流法成功分离培养获得小鼠原代肝细胞及HSC，肝细胞糖原染色法及CK-18细胞化学染色法证实原代肝细胞纯度> 95%，免疫荧光染色显示HSC的α-SMA阳性率>90%; exo Easy Maxi Kit试剂盒提取的肝细胞外泌体在电镜下呈圆形或椭圆形，NTA结果显示其直径约140 nm,Western blot实验可见外泌体标志物分化抗原9(CD9)和肿瘤易感基因101(TSG101)表达;与空白对照组比较，HSCs与肝细胞外泌体共培养后HSCs的α-SMA及COL1A1 mRNA表达水平降低(P <0.05)。结论 成功提取原代肝细胞外泌体，该外泌体可抑制HSC活化。

• 单位
  贵州省人民医院; 广西医科大学第一附属医院