基于工程化转座酶的少量细胞RNA-seq文库构建的研究

作者：许昊; 刘小亮; 胡玲; 于海礼; 黄毅; 李洪涛; 万瑛^*

来源：第三军医大学学报, 2019, 41(09): 866-870.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201812190

• Tn5转座酶
• RNA-seq
• 文库构建

目的优化Tn5转座酶纯化和组装过程,建立少量细胞高质量转录组深度测序文库(RNA-Seq)的构建策略。方法构建Tn5转座酶表达载体pSUMO-Tn5,优化Tn5转座酶表达、亲和纯化和组装过程,比较不同组装方式的Tn5转座酶构建少量RAW264.7细胞RNA-seq文库效率。结果 pSUMO-Tn5转化细菌高效表达可溶性Tn5转座酶,亲和纯化获得高纯度Tn5蛋白,超滤纯化的Tn5转座体显著降低少量细胞RNA-Seq中的无效数据(P<0.05)。结论成功表达和纯化Tn5转座酶,超滤后Tn5转座体可降低少量细胞RNA-seq文库构建中的非特异扩增,建立一种高效的少量细胞RNA-Seq策略。

• 单位
  第三军医大学; 西南大学; 基础医学院; 中国人民解放军陆军军医大学