抗人骨桥蛋白单克隆抗体制备及其特异性研究

作者：姚辉; 聂新民; 黄作良

来源：邵阳学院学报(自然科学版), 2010, (02): 58-63.

• 骨桥蛋白
• 原核表达
• 单克隆抗体 ospteopontin
• prokaryotic expression
• monoclonal antibodies

利用RT-PCR技术克隆人骨桥蛋白(hOPN)基因,构建OPN原核表达质粒pET-32a(+)-hOPN,转化BL21菌株,经IPTG诱导表达重组人骨桥蛋白(rhOPN).以纯化的rhOPN为免疫原,免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合.通过有限稀释法进行克隆和间接ELISA筛选,获得抗人OPN蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,以ELISA、Western blot对抗体特异性进行鉴定.通过竞争抑制试验对单克隆抗体识别抗原位点进行分析.结果共获得2株抗人OPN单克隆抗体,分别命名为8F1和2B5,亚型测定皆为IgG1.通过细胞侵袭抑制试验检测,2株抗人OPN mAb皆能很好地抑...

• 单位
  邵阳医学高等专科学校附属医院