正交设计优化莲雾ISSR-PCR反应体系

作者：张立杰; 李韬; 魏秀清; 章希娟; 陈志峰; 许家辉

来源：福建农业学报, 2012, (04): 343-349.

DOI：10.19303/j.issn.1008-0384.2012.04.007

• 莲雾
• ISSR
• 体系优化
• 正交设计
• 引物筛选 Waxapple(Syzygium samarangense)
• ISSR
• optimization
• orthogonal design
• primers selection

以莲雾品种‘农科一号’为试材,采用经改良的CTAB法提取莲雾叶片的DNA,探讨了Mg2+、dNTPs、引物浓度、Taq聚合酶、模板DNA含量对莲雾ISSR-PCR的影响。建立了总体积为25μL的莲雾ISSR-PCR反应体系:Mg2+浓度为3.0mmol.L-1﹑dNTP浓度为0.2mmol.L-1﹑primer浓度为0.4μmol.L-1﹑Taq DNA聚合酶1.5U﹑模板DNA含量为30ng,并含2.0μL 10×PCR Buffer(Mg2+free)。应用该反应体系对‘农科一号’和‘农科二号’进行ISSR-PCR扩增,共筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。

• 单位
  福建省农业科学院果树研究所