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摘要
目的构建载血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)-si RNA靶向超声微泡,研究其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用。方法薄膜-水化-超声乳化法构建载LOX1-si RNA纳米级超声微泡(nanobubbles,NBs-si RNA)。从Wistar大鼠体内分离、培养动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)。通过凝胶迁移阻滞实验与si RNA细胞内化实验验证超声微泡可运载si RNA进入靶细胞内;q RT-PCR及Western blot检测LOX1的m RNA和蛋白表达水平;油红O染色观察细胞内脂质聚集情况。构建Wistar大鼠动脉硬化模型,实验组经鼠尾静脉注射含有LOX-1-si RNA的NBs-si RNA微泡100μg,并使用超声仪照射。治疗15 d后,取标本HE染色后与对照组对比动脉硬化斑块病变程度;免疫组化法检测斑块组织中LOX-1表达情况。结果凝胶迁移阻滞实验结果显示,证实NBs与si RNA结合成功。激光共聚焦显微镜观察证实NBs可通过超声照射介导si RNA内化入VSMCs之中。q RT-PCR及Western blot实验结果显示实验组VSMCs LOX-1 m RNA及蛋白表达水平降低(P<0.01)。油红O染色显示实验组细胞泡沫化较ox LDL组减弱。组织标本HE染色表明实验组大鼠动脉斑块病变中内膜增厚、中膜萎缩及炎细胞浸润情况较对照组减轻;免疫组化实验结果显示,实验组动脉斑块中LOX-1表达水平较各对照组降低(P<0.01)。结论成功制备能够有效运载LOX-1-si RNA的超声微泡,体内外实验证实该微泡可以在超声辐照下内化入靶细胞内部,下调LOX-1表达,减少泡沫细胞形成,降低动脉硬化斑块病变的严重程度。
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