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摘要
背景目前,干细胞疗法治疗视网膜变性疾病是眼科研究的热点之一。研究已证实骨髓间充质干细胞(MSCs)可以体外诱导分化为视网膜色素上皮(RPE)样细胞,但由于取材困难,临床应用受到了一定的限制。人脂肪间充质干细胞(ADSCs)与MSCs有类似的特性且容易获取,但人ADSCs能够诱导分化为RPE细胞的研究尚不多见。目的评估人ADSCs向RPE样细胞诱导分化的可行性及其在体应用的安全性。方法将体外培养的第3代人ADSCs接种于6孔板进行培养,12 h后于实验组培养液中加入100 ng/ml表皮生长因子(EGF)、50μmol/L牛磺酸和5×10-7moL/L视黄酸进行诱导,常规培养的细胞作为对照组。采用RPE细胞标志物Pan细胞角蛋白(Pan-CK)单克隆抗体进行免疫荧光检测,对诱导的细胞进行鉴定,采用细胞膜示踪剂PKH26标记法示踪诱导细胞,将诱导后的RPE样细胞悬液1μl注入6只BALB/c裸鼠的右眼玻璃体腔,另6只裸鼠玻璃体内注射等容量PBS。于注射后1个月摘取实验动物右眼眼球,各组中3只眼球用于组织病理学检查,在光学显微镜下观察玻璃体视网膜的形态学改变,另3只眼球在透射电子显微镜下观察玻璃体视网膜超微结构的改变,评估诱导细胞在体应用的安全性。结果体外培养的第3代人ADSCs呈细长多角形,生长良好。对照组细胞Pan-CK表达缺失,而诱导细胞的细胞膜Pan-CK表达阳性,呈红色荧光。诱导的细胞经PKH26标记后细胞膜呈红色荧光。诱导的细胞悬液于裸鼠玻璃体内注射后1个月,光学显微镜下可见诱导细胞位于视网膜表面,视网膜各层组织结构排列清晰;透射电子显微镜下可见视网膜神经节细胞(RGCs)细胞膜完整,线粒体结构正常,染色质均匀。结论人ADSCs体外诱导后可分化为RPE样细胞,PKH26可对诱导后细胞进行细胞示踪,分化的细胞玻璃体腔注射后短期内未发现视网膜的不良反应。
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单位中山大学中山眼科中心; 内蒙古医科大学附属医院; 天津市眼科医院; 中南大学
