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摘要
单一的抗病、抗虫品种已经不能满足需求，因此本研究通过基因工程技术构建同时具有抗病基因NPR1基因和抗虫基因Cry1Ab13-1基因并以bar基因为筛选标记的植物双价表达载体并进行遗传转化，以获得优良的特点同时兼具抗病抗虫的新株系。通过农杆菌介导法、花粉管通道法和超声波介导法将构建好的植物表达载体在玉米中进行遗传转化，并对T2代转基因植株进行PCR检测、Southernblotting整合度检测，实时荧光定量PCR转录水平检测、室外抗虫以及室内抗病初步鉴定。结果表明：共获得T2代PCR阳性植株14株，SouthernBlot结果表明，NPR1和Cry1Ab13-1双价基因已经分别以单拷贝形式整合到玉米受体中。实时荧光定量PCR结果表明NPR1和Cry1Ab13-1双价基因在不同组织间相对表达量均高于阴性对照，NPR1基因在根、茎、叶中相对表达量均值分别为3.302、1.45、9.75；Cry1Ab13-1基因在根、茎、叶中相对表达量均值分别为3.15、1.61、9.89。室外接虫抗虫性鉴定结果表明阳性植株7 d后虫子存活率为3.28%，而10 d后虫子存活率为2.06%，抗虫级别由受体的感虫级别提高到中抗级别；室内抗病鉴定表明阳性植株抗病等级为高抗，而受体植株则为中抗，抗病能力明显提高。
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