小鼠CXCR4基因慢病毒载体构建与真核表达

作者：李淼; 陈伟; 安新江; 曹军华; 范从海; 尹力扬; 张春霞; 孙浩淼

来源：中国实验血液学杂志, 2013, (01): 198-202.

• CXC型趋化因子受体4
• 慢病毒载体
• 基因表达
• 293FT细胞 CXC chemokine receptor 4
• lentiviral vector construction
• gene expression
• 293FT cells

本研究旨在克隆小鼠CXC型趋化因子受体4(CXCR4)基因,构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的CXCR4重组慢病毒载体并在真核细胞中表达。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)以C57BL/6小鼠骨髓细胞为模板克隆全长型CXCR4基因,连接至克隆载体pCR-Blunt,经限制性内切酶酶切后亚克隆至慢病毒转移载体,构建携带EGFP及CXCR4双顺反子结构的自身失活型重组慢病毒表达质粒;同时构建LV-IRES-EGFP作为对照质粒;通过脂质体转染法与包装质粒及包膜蛋白质粒共转染包装细胞293FT,超速离心浓缩病毒颗粒后转染293FT细胞,采用荧光显微镜和流式细胞术(FCM)检测EGFP的...

• 单位
  徐州医学院附属医院