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摘要
采用富阳离子多肽诱导重组蛋白自组装为纳米粒策略有望保持蛋白药物的活性、生物相容性,同时延长其半衰期、提高靶向性,有广泛的应用前景。维持蛋白质药物(尤其是具有多个半胱氨酸残基的蛋白质)在自组装纳米粒中的活性结构对于该类药物的研究至关重要。该研究设计了具有多个游离半胱氨酸残基的重组蛋白CRGDC-T22-TAT-Beclin1-GFP-RGDKG-His tag及其对照蛋白序列,构建表达载体、获得大肠杆菌Trans B(DE3)工程菌。该研究分析了非变性条件和变性条件下进行Ni-NTA亲和层析纯化的差异。在变性条件下纯化获得重组蛋白,经复性后得到自组装蛋白质纳米粒,采用动态光散射法测定蛋白纳米粒粒径,使用酶标仪分析重组蛋白的荧光特性,用CCK-8法测定蛋白质纳米粒抑制MCF-7细胞生长的活性。结果显示,重组蛋白CRGDC-T22-TATBeclin1-GFP-RGDKG-His tag形成的纳米粒粒径为(45.13±5.78) nm;其荧光最大发射波长为510 nm,与野生型GFP相同;浓度为10μmol/L的重组蛋白与人乳腺癌细胞MCF-7共同孵育48 h,可将细胞活力降低至31.00%±1.13%。以上结果表明,相比于非变性纯化法,采用变性-复性法可以纯化具有多个半胱氨酸残基的重组蛋白,获得具活性的自组装蛋白质纳米粒。
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