GnRH-PEⅡ-luffinS重组嵌合毒素的制备与细胞毒性检测

作者：刘艳华; 高姗; 康琳; 王俊红; 赵金银; 高艳丽; 胡瑞; 王景林

来源：中国生物工程杂志, 2008, (09): 46-51.

DOI：10.13523/j.cb.20080908

• Ⅰ型促性腺激素释放激素
• 绿脓杆菌外毒素结构域Ⅱ
• 丝瓜毒素
• 重组嵌合毒素
• 细胞毒性 GnRH Ⅰ LuffinS2 PEⅡ Recombinant chimeric toxin Cytotoxicity

目的:制备以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH Ⅰ)为导向部分,以绿脓杆菌外毒素的结构域Ⅱ(PEⅡ)为转膜区,以丝瓜毒素luffinS2为毒性部分的重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS,体外实验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:重叠PCR法扩增GnRH-PEⅡ-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化。纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa,A549,HepG-2,SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒作用。结果:成功构建了GnRH-P...

• 单位
  军事医学科学院; 西北农林科技大学; 中国人民武装警察部队后勤学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室