雷公藤红素通过内质网应激相关通路促进人骨肉瘤HOS细胞凋亡

作者：陈艳阳; 欧云生; 陶勇; 尹航; 黄秋; 钟申熹; 李剑箫

来源：肿瘤, 2017, 37(09): 901-908.

DOI：10.3781/j.issn.1000-7431.2017.11.276

• 骨肉瘤
• 内质网应激
• 细胞凋亡
• 雷公藤红素

目的:观察雷公藤红素对人骨肉瘤HOS细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 :用不同浓度(0、1.5、2.5、3.5和4.5μmol/L)的雷公藤红素处理骨肉瘤HOS细胞24 h后,采用CCK-8法检测细胞活性,确定最佳实验浓度。采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Hoechst33258染色后相差显微镜观察细胞凋亡的形态学改变,FCM法检测细胞凋亡率和细胞内Ca2+浓度变化,蛋白质印迹法检测结合免疫球蛋白(binding immunoglobulin protein,BIP)、钙联蛋白(calnexin,CNX)、内质网氧化还原酶1-Lα(endoplasmic reticulum oxidoreductin 1-L alpha,Ero1-Lα)、蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)、肌醇依赖酶1(αinositol-requiring enzyme 1 alpha,IRE1α)、蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和磷酸化PERK(phosphorylatedPERK,p-PERK)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancerbinding protein homologous protein,CHOP)、剪切型caspase-12(cleavedcaspase-12,c-caspase-12)和c-caspase-3的表达变化。结果 :不同浓度的雷公藤红素均可抑制HOS细胞活性(P值均<0.05),且呈浓度依赖性。3μmol/L雷公藤红素处理24 h后,HOS细胞形态明显萎缩、紊乱,漂浮细胞增多,且出现明显核固缩和核碎裂等典型的细胞凋亡形态学改变。与未处理对照组相比,3μmol/L雷公藤红素处理24 h后细胞凋亡率和细胞内Ca2+浓度明显升高(P值均<0.05)。3μmol/L雷公藤红素处理24 h后,内质网应激相关标志蛋白BIP、CNX、Ero1-Lα、PDI、IRE1α和p-PERK以及内质网应激介导凋亡相关蛋白CHOP、c-caspase-12和c-caspase-3的表达水平明显升高(P值均<0.05)。结论 :雷公藤红素可诱导人骨肉瘤HOS细胞凋亡,其作用机制可能与内质网应激介导细胞凋亡通路有关。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院