利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼sf3a1基因敲除突变体

作者：刘倩文; 潘军; 韩秋月; 周建峰; 荣小至; 白艳^*

来源：中国海洋药物, 2023, 42(03): 23-30.

DOI：10.13400/j.cnki.cjmd.2023.03.001

• 斑马鱼
• CRISPR/Cas9
• sf3a1基因

目的 构建斑马鱼sf3a1基因敲除突变体，以研究剪接因子SF3A(splicing factor 3a)中SF3A1/Sf3a1在生物体中的详细生理功能及其调控机制。方法 利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼sf3a1突变体，通过T7酶切及基因组测序筛选得到F0代及能够稳定遗传的F1代突变体，F1代自交后得到F2代，观察Sf3a1纯合缺失对斑马鱼生长发育的影响。结果 基因型鉴定结果显示，得到2种不同类型突变品系，分别为-7 bp和（-2+13）bp。杂合sf3a1突变体正常存活且可育，而合子型纯合突变体斑马鱼胚胎发育出现明显异常，24 hpf胚胎发育迟缓，细胞出现大量凋亡，斑马鱼mRNA剪接发生异常，于72 hpf之前死亡。结论 利用CRISPR/Cas9技术成功构建了斑马鱼sf3a1基因敲除突变体，为探索sf3a1对斑马鱼生长发育的影响提供了实验材料和依据。

• 单位
  中国海洋大学; 医药学院