内皮祖细胞来源小细胞外囊泡促进小鼠脊髓损伤修复的实验研究

作者：林俊卿; 黄腾立; 高涛; 郑宪友^*

来源：中国修复重建外科杂志, 2021, 35(04): 488-495.

DOI：10.7507/1002-1892.202009130

• 脊髓损伤
• 内皮祖细胞
• 小细胞外囊泡
• 外泌体
• 神经修复
• 小鼠

目的探讨内皮祖细胞来源小细胞外囊泡(endothelial progenitor cells derived small extracellular vesicles,EPCs-sEVs)对小鼠脊髓损伤的治疗效果。方法取20只C57BL/6雄性小鼠股骨及胫骨骨髓分离培养EPCs,采用双荧光染色及流式细胞术鉴定;然后对EPCs进行传代,收集P2～P4代细胞上清,以超速离心法提取EPCs-sEVs,采用透射电镜、纳米流式检测仪及Western blot进行鉴定。取40只C57BL/6雌性小鼠随机分为4组(n=10),其中假手术组仅切除T10椎板,模型组以及低、高浓度干预组制备T10脊髓损伤模型;模型制备后30 min、3 d及7 d低、高浓度干预组经尾静脉分别注射浓度为1×109、1×1010个/mL的EPCs-sEVs。术后行小鼠行为学检测(BMS评分、斜板实验、Von Frey实验),术后4周取材行大体、HE染色及免疫组织化学染色观察脊髓组织结构变化。另取3只C57BL/6雌性小鼠制备T10脊髓损伤模型后,经尾静脉注入DiR标记的EPCs-sEVs,30 min后活体成像仪观察EPCs-sEVs是否达脊髓损伤部位。结果经鉴定,成功获取小鼠骨髓来源的EPCs及EPCssEVs;活体成像仪观察显示EPCs-sEVs在注射后30 min内募集至脊髓损伤区域。行为学检测示,术后2周内两干预组BMS评分及斜板实验最大角度与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05),2周后均明显优于模型组(P<0.05);术后4周两干预组Von Frey实验示机械痛阈值明显高于模型组、低于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05);上述指标两干预组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,两干预组损伤节段脊髓组织缺损较小,单个核细胞浸润较少,组织结构恢复明显,血管新生更多(P<0.05);两干预组间无明显差异。结论 EPCs-sEVs可促进小鼠脊髓损伤修复,为脊髓损伤的生物治疗提供了新的方案。

• 单位
  上海交通大学