PTPIP51调节线粒体-内质网结构偶联在N2a细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤中的作用

作者：于群; 赵慧; 王炳琪; 陈怀龙; 张文博; 王海鹏; 王明山; 时飞^*

来源：国际麻醉学与复苏杂志, 2022, 43(02): 124-128.

• 线粒体-内质网结构偶联
• 氧糖剥夺
• 蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用蛋白51
• 钙超载

目的观察蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用蛋白(protein tyrosine phosphatase interacting protein, PTPIP)51对线粒体-内质网结构偶联(the mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes, MAMs)的影响, 探讨其在小鼠神经母细胞瘤(mouse neuro-blastoma N2a, N2a)细胞氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)损伤中的作用。方法将指数生长的N2a细胞株置于37 ℃、5%CO2、95%空气的细胞培养箱内培养至细胞密度达70%, 按照随机数字表法分为4组:对照组(C组)、氧糖剥夺/复糖复氧组(OGD/R组)、干扰小RNA(small interfering RNA,siRNA)-PTPIP51转染组(siRNA组)、siRNA-NC转染组(NC组)。OGD/R模型制备:将N2a细胞高糖培养液换成低糖培养液, 置于37 ℃、5%CO2、95% N2缺氧环境中培养3 h后重新置于高糖培养液中正常条件下培养。C组继续在正常条件下培养;OGD/R组仅制备OGD/R模型;siRNA组与NC组在OGD/R模型制备前48 h分别转染siRNA-PTPIP51及siRNA-NC, 余同OGD/R组。各组于复糖复氧12 h、24 h后收集细胞检测。细胞计数试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)法检测细胞存活率, 流式细胞术检测细胞凋亡率, 实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR, RT-qPCR)检测PTPIP51 mRNA表达水平, Western blot检测PTPIP51蛋白水平, 共聚焦显微镜观察线粒体-内质网共定位水平。结果与C组比较, 其他3组细胞存活率降低(P<0.05), 细胞凋亡率、线粒体-内质网共定位水平、PTPIP51 mRNA及PTPIP51蛋白水平均升高(P<0.05);与OGD/R组比较, siRNA组细胞存活率升高(P<0.05), 细胞凋亡率、线粒体-内质网共定位水平、PTPIP51 mRNA及PTPIP51蛋白水平均降低(P<0.05)。结论 PTPIP51表达上调介导的线粒体-内质网共定位水平提高是N2a细胞OGD/R损伤的机制之一。

• 单位
  潍坊医学院; 烟台市烟台山医院; 青岛市市立医院; 青岛大学