科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
为了提高蛋白产量，通过密码子优化漆酶基因LAC1,构建pET-32a(+)-LAC1重组载体，并在Escherichiacoli BL21(DE3)中进行表达。其酶学性质表明，目的漆酶蛋白分子质量约为65 ku,其活性在55℃以下及pH 3.5～5.0时较为稳定，5 mmol/L的Ca2+、Cu2+、Mg2+对重组漆酶活性具有促进作用，镍柱纯化后漆酶比活力为32.3 U/mg。通过分析重组LAC1漆酶的结构及活性中心，并与其他真菌漆酶进行序列比对，找出其差异性区段，在化学合成该区段DNA片段时，在特定位点掺入任意碱基，从而引入随机突变，构建随机突变文库并对库容量进行测定，通过批量筛选得到1株酶活提升的突变体，同源建模预测其三维结构。结果表明，通过定向突变获得的突变酶共有4处氨基酸发生变化，其酶活性提高约2.3倍。
-
单位生物工程学院; 东华大学
