细胞因子信号抑制因子1基因真核高表达质粒的构建及其在NOK细胞中的表达

作者：许雅鑫; 吴彬; 游锦梅; 李钰; Yang Yong; 陈显久

来源：中国生物制品学杂志, 2015, 28(04): 348-351.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.000844

• 细胞因子信号抑制因子1
• 真核细胞
• 基因表达
• NOK细胞

目的构建细胞因子信号抑制因子1(suppressors of cytokine signaling 1,SOCS1)基因真核高表达质粒,并在口腔上皮细胞系NOK细胞中进行表达。方法提取健康人外周静脉血基因组DNA,PCR扩增SOCS1基因,与p EGFPN1载体连接,构建重组真核表达质粒p EGFP-N1-SOCS1,用Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切鉴定及测序后,转染NOK细胞,采用荧光显微镜及Western blot法检测转染细胞中SOCS1蛋白的表达。结果重组真核表达质粒p EGFP-N1-SOCS1经双酶切及测序鉴定证实构建正确。p EGFP-N1-SOCS1转染NOK细胞72 h后获得表达,SOCS1蛋白的表达量为(134.67±9.07)%,较转染空质粒组约升高4倍,二者差异有统计学意义(P=0.001)。结论成功构建了SOCS1基因真核高表达质粒,为进一步研究SOCS1的生物学功能奠定了基础。

• 单位
  太原钢铁(集团)有限公司总医院; 太原钢铁(集团）有限公司总医院; 山西医科大学; 中心实验室; 山西医科大学第一医院