苜蓿花叶病毒RT-PCR和RT-qPCR检测技术体系的建立与应用

作者：高艳玲; 范国权; 程胜群; 张威; 邱彩玲; 申宇; 聂先舟; 白艳菊^*; 吕文河^*

来源：植物保护学报, 2022, 49(02): 515-527.

DOI：10.13802/j.cnki.zwbhxb.2022.2021040

• 苜蓿花叶病毒
• TaqMan探针RT-qPCR
• EvaGreen RT-qPCR
• RT-PCR
• 马铃薯

为准确检测侵染马铃薯核心种苗和种薯的苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV)，以AMV马铃薯分离株为阳性材料，建立AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和基于EvaGreen及TaqMan探针的反转录实时荧光定量PCR(reverse transcription real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)检测技术，比较3种方法的检测灵敏度，并测定不同马铃薯品种6种组织和桃蚜Myzus persicae、蓟马体内AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的含量。结果表明：建立的TaqMan探针RT-qPCR法对RNA 1和RNA 2的检测灵敏度分别为1.45×101copies/μL和1.46×101copies/μL，分别是EvaGreen RT-qPCR法和RT-PCR法的10倍；建立的TaqMan探针RT-qPCR法对RNA 3的检测灵敏度与EvaGreen RT-qPCR法相同，为1.15×102copies/μL，是RT-PCR法的10倍。丽薯15号6种组织中AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的含量为3.04×106～1.67×108copies/μL，以叶片中病毒平均含量最高；中薯21号6种组织中AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的含量为2.94×102～4.78×108copies/μL，未发现明显分布规律。蓟马体内AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的含量分别为8.64×104～4.76×107、2.13×103～1.50×105和8.08×103～4.96×105copies/μL,RNA 1的含量高于RNA 2和RNA 3。桃蚜体内AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的含量分别为4.71×103～3.44×104、2.22×102～1.32×105和5.41×101～8.08×102copies/μL,RNA 3的含量最低。表明RT-PCR法、TaqMan探针RT-qPCR法和EvaGreen RT-qPCR法均可有效扩增马铃薯6种组织和2种昆虫中的AMV。

• 单位
  东北农业大学; 黑龙江省农业科学院经济作物研究所