C57BL/6NcGAS基因敲除鼠的构建及对猪伪狂犬病病毒增殖的影响

作者：李丽蕴; 梁东阁; 于海深; 郭江涛; 曾磊^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(10): 2162-2170.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.10.24

• 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)
• 伪狂犬病病毒(PRV)
• 天然免疫
• 小鼠

胞质DNA感受器环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase, cGAS)能够识别胞质中的双链DNA(double stranded DNA,dsDNA),从而激活Ⅰ型干扰素信号通路抵御外界病原微生物的感染。为研究cGAS基因对猪伪狂犬病病毒(PRV)增殖的影响，本试验首先利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建cGAS基因敲除小鼠，通过H&E染色检测C57BL/6N小鼠和C57BL/6N-cGAS-/-小鼠肺脏和脑组织形态差异及感染PRV后肺脏组织中炎性浸润的影响；Q-PCR检测C57BL/6N小鼠和C57BL/6N-cGAS-/-小鼠感染PRV后对PRV-gB、PRV-TK、IFN-β、ISG15和ISG20基因mRNA表达水平的差异；Western blot及免疫组化检测C57BL/6N小鼠和C57BL/6N-cGAS-/-小鼠感染PRV后PRV-gB和PRV-gE蛋白表达水平；最后利用病毒PFU法检测cGAS敲除鼠对PRV子代病毒滴度的影响。Western blot检测结果显示在C57BL/6N小鼠肺脏和脑组织中cGAS基因敲除成功，同时H&E染色结果显示，cGAS基因敲除对其肺脏和脑组织形态无影响，但感染PRV后C57BL/6N-cGAS-/-小鼠组织中的炎性浸润明显高于C57BL/6N;小鼠存活率试验结果显示，感染PRV后，C57BL/6N-cGAS-/-与C57BL/6N小鼠相比，存活率显著降低。Q-PCR及Western blot检测显示C57BL/6N-cGAS-/-小鼠可以促进PRV-gB和PRV-gE mRNA转录和蛋白表达；PFU测定结果显示，感染PRV后，C57BL/6N-cGAS-/-小鼠体内的病毒滴度显著高于C57BL/6N小鼠。另外，Q-PCR结果显示该基因敲除小鼠可以抑制PRV感染引起的IFN-β、ISG15和ISG20基因mRNA表达上调。以上结果表明cGAS抑制PRV在小鼠体内的增殖。

• 单位
  河南农业大学