基于自噬/凋亡研究淫羊藿女贞子合用糖皮质激素对3-MA诱导的ASMCs自噬抑制状态的作用

作者：王瀚; 龙玉婷; 马紫童; 李玉曼; 马再娜; 于萍; 刘仁慧^*

来源：时珍国医国药, 2023, 34(01): 9-12.

• 气道重塑
• 气道平滑肌细胞
• 糖皮质激素
• 淫羊藿/女贞子
• 自噬/凋亡

目的 研究淫羊藿女贞子合用糖皮质激素对自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)抑制气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells, ASMCs)自噬的影响。方法 培养大鼠原代ASMCs,随机分为5组，即正常组(正常大鼠血清)、3-MA组(正常大鼠血清+3-MA)、激素组(正常大鼠血清+3-MA+地塞米松)、中药组(3-MA+淫羊藿女贞子含药血清)、合用组(3-MA+淫羊藿女贞子含药血清+地塞米松)。根据分组分别加入正常大鼠血清或含药大鼠血清；除正常组外，其余各组同时加入3-MA刺激ASMCs, 48h后进行检测。电镜观察细胞超微结构；MTT法检测细胞活力：免疫细胞化学法检测增殖蛋白Ki-67蛋白表达；Annexin V-FITC/PI法检测凋亡活性；Western Blot或免疫荧光法检测LC3、Bax、Bcl-2、P53、Caspase-3、Beclin-1、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与3-MA组比较，各给药组可不同程度地增加3-MA抑制的自噬活性，上调LC3 II/I比值、Beclin-1表达，下调mTOR及p-mTOR表达下调；继续下调ASMCs细胞活力并上调凋亡活性，其中激素单用或与中药合用可显著下调Ki-67蛋白表达而抑制细胞增殖，各给药组Bax、Caspase-3、P53表达显著上调；此外，与激素组相比，合用组Beclin-1、mTOR、Bax、Bcl-2、Bax/Bcl-2、Caspase-3、P53均有统计学差异。结论 激素、中药或二者合用均可重新激活3-MA引发的自噬阻断，进一步抑制ASMCs增殖、诱导细胞凋亡，且合用后在一定程度上发挥协同增效作用。

• 单位
  医药学院; 首都医科大学