大菱鲆源杀鱼爱德华氏菌的分离鉴定及其毒力和耐药基因的检测分析

作者：黄华; 于广磊; 王力勇; 高雁; 张岚; 孙佰鸣; 庄焱文; 王鹤

来源：大连海洋大学学报, 2022, 1-17.

DOI：10.16535/j.cnki.dlhyxb.2022-060

• 大菱鲆
• 杀鱼爱德华氏菌
• 分离鉴定
• 毒力基因
• 耐药基因

为了研究2019年山东省烟台市某大菱鲆Scophthalmus maximus养殖场出现的以腹水、体表及内脏出血为主要症状的疾病发病原因，通过平板划线法从患病濒死大菱鲆（体质量为189～523 g）肝、肾、脾、心等组织中分离获得1株优势菌，采用形态学观察、16S rRNA、gyrB基因和rpoB基因序列分析、PCR特异性引物扩增和人工回归感染试验等方法对优势菌进行鉴定，检测其毒力基因、耐药基因携带情况，并采用纸片扩增法（K-B）检测分离株对10类23种抗生素的敏感性。结果表明：从患病鱼分离获得的菌株生理生化特征为革兰氏阴性杆菌，赖氨酸、鸟氨酸、枸橼酸、葡萄糖产酸、葡萄糖发酵等为阳性，精氨酸、蔗糖、甘露醇苦杏仁苷、尿素、硝酸盐还原、氧化酶等呈阴性；经16S rRNA、gyrB基因、rpoB基因序列比对、爱德华氏菌特异性引物扩增等鉴定其为杀鱼爱德华氏菌Edwardsiella piscicida；该菌的毒力基因型为fimA~(+)－fimB~(+)－fimC~(+)－fimD~(+)－esrB~(+)－mukF~(+)－katB~(+)－sodB~(+)－citC~(+)－gadB~(+)；耐药基因型为TEM~(+)－ant(3")-Ⅰ~(+)－tet(A)~(+)－mcr-1~(+)－Sul2~(+)－Sul3~(-)－oqxA~(-)；将分离菌株制备成7.8×10~(10 )、7.8×10~(9)、7.8×10~(8 )、7.8×10~(7 )CFU/mL 4个梯度，腹腔注射健康大菱鲆，得到菌株对受试鱼的半致死浓度（LD_(50)）为1.2×10~(8) CFU/mL；药敏试验显示，该菌株对磺胺类2种、多肽类2种、利福霉素类1种在内的5种抗生素类药物耐药；对β-内酰胺类5种、氨基糖苷类3种、喹诺酮类5种、大环内酯类1种、氯霉素类1种、呋喃类1种在内的16种抗生素敏感。研究表明，首次从大菱鲆上检出携带5种耐药基因的杀鱼爱德华氏菌，为鱼源耐药性杀鱼爱德华氏菌的分子特性研究、致病机理、药物防治等研究提供理论支撑。

• 单位
  山东省海洋资源与环境研究院